Các phương pháp test histamine

1. Histamine - Tổng quan

Giới hạn cho phép của thị trường

2. Các phương pháp test histamine

Nồng độ histamine vẫn tăng trong thực phẩm được làm lạnh, do đó quan trọng là bạn phải tiến hành phân tích trực tiếp sau khi lấy mẫu.
Chỉ sử dụng lọ nhựa (ví dụ: polypropylene, PP) để chuẩn bị mẫu. Histamine hấp phụ trên bề mặt thủy tinh làm độ thu hồi (dẫn đến sai số âm).
Thông thường, khi chuẩn bị mẫu cá, lấy phần da và loại bỏ xương, nhưng về nguyên tắc là giữ lại toàn bộ những phần có thể ăn được, ví dụ, loại bỏ phần da cá trê không ăn được, giữ lại xương cá hồi đóng hộp đã được làm mềm và cá trích được lấy nguyên con.

2.1  Phương pháp test nhanh histamine bằng kỹ thuật ELISA (R-biopharm)

R-Biopharm là nhà phát triển hàng đầu các giải pháp thử nghiệm cho chẩn đoán lâm sàng và phân tích thực phẩm & thức ăn chăn nuôi của Đức.
Trong cả hai lĩnh vực, bộ dụng cụ xét nghiệm R-Biopharm đều mang lại độ chính xác và độ tái lặp cao, đáp ứng các yêu cầu của người dùng.
Bộ kit xét nghiệm Histamine của R-Biopharm đã đạt chứng nhận AOAC-RI 031901, phương pháp được chứng minh độ đúng tương đồng với phương pháp sắc ký, đồng thời cho giới hạn phát hiện thấp. 
​

2.2  Phương pháp test nhanh histamine bằng chíp cảm biến Comilu

  - Quy trình chung: Quy trình gồm  bước: thu thập mẫu -> chiết mẫu -> đo kết quả
Có 2 cách chiết mẫu bằng máy quay ly tâm hoặc chiết bằng nén qua xy lanh.
- Thời gian thực hiện: 3 phút - 10 phút tùy tình trạng mẫu đông cứng hay mẫu mềm. 
* Đặc biệt: enzym, histamin oxidase, được phát triển bởi Viện Công nghệ Kanagawa và được thương mại hóa bởi Fujidenoro Co., Ltd. - Nhật Bản.
Nó hoạt động mạnh hơn các enzym có sẵn trên thị trường đồng thời cải thiện khả năng phát hiện histamin và hiệu suất thu hồi. Tính chất của enzyme và sự ổn định của màng cố định enzyme cũng chính là ưu việt của chip cảm biến enzyme Comilu

2.3 Nên chọn phương pháp test histamine nào?

Mỗi một phương pháp test histamine, dù là test định lượng chính xác hay test nhanh, đều có những ưu nhược điểm và những yêu cầu nhất định để thực hiện. Để biết phương pháp nào phù hợp với nhu cầu của bạn. Trước tiên, mời bạn xem qua bảng so sánh một số đặc điểm của các phương pháp test histamine sau đây:
 

	Test định lượng Histamine bằng HPLC	Test nhanh histamine bằng chip cảm biến Comilu	Test định lượng histamine bằng pp ELISA (R-Bipharm)	Test định lượng histamine bằng pp đo huỳnh quang
Các bước thực hiện	Thu thập mẫu -> Làm sạch mẫu => Tạo dẫn xuất -> Đo kết quả bằng máy sắc ký   *Xử lý mẫu cực kỳ quan trọng và phức tạp vì nền mẫu ảnh hưởng tới KQ phép đo.	Thu thập mẫu -> chiết mẫu -> cho mẫu vào chip chứa enzyme -> đo kết quả   *Có 2 cách chiết mẫu bằng máy quay ly tâm hoặc chiết bằng nén qua xy lanh.	Thu thập mẫu -> Chiết mẫu -> Loại Ascobic (nếu có) -> Phân tích bằng ELISA   *Chiết mẫu bằng máy quay ly tâm tương đối đơn giản, thao tác phân tích ELISA nhanh nhưng nhiều bước.	Thu thập mẫu -> Chiết mẫu bằng methanol -> Cho qua cột trao đổi ion -> Phân tích bằng máy đo huỳnh quang *Chiết mẫu bằng methanol tương đối đơn giản, thao tác qua cột, thực hiện phản ứng lên màu cần nhanh chóng, chính xác.
Nguyên tắc	Các thành phần trong mẫu được tách ra sau khi đi qua cột sắc ký Đầu dò ghi nhận tín hiệu của mẫu và chuẩn. Dựa vào đường chuẩn, tính toán chính xác lượng histamin có trong mẫu. Khả năng phân tách của cột sắc ký cho phép hạn chế tình trạng nhiễu/ dương tính giả	Phương pháp phát hiện bằng chip cảm biến với điện cực carbon đã cố định enzyme histamin oxidase có hoạt tính mạnh. H2O2 sinh ra từ phản ứng enzyme với cơ chất, được chuyển thành tín hiệu điện. Nồng độ Histamine có thể được tính từ tín hiệu này.	Việc xác định dựa trên enzym histamin dehydrogenase, enzym này xúc tác quá trình khử amin - oxy hóa của histamin với sự có mặt của chất mang điện tử giúp chuyển đổi thuốc thử thành sản phẩm có màu. Cường độ màu thu được tỷ lệ thuận với nồng độ histamin và được đo ở bước sóng 450 nm.	Mẫu được chiết bằng metanol 75 % (thể tích). Cho dịch chiết đi qua cột trao đổi ion. Bổ sung dung dịch o-phthaldialdehyd (OPT) vào dịch rửa giải nhằm tạo dẫn xuất huỳnh quang với histamin. Cường độ huỳnh quang của các dẫn xuất được đo bằng máy đo huỳnh quang và hàm lượng histamin được định lượng, sử dụng chất ngoại chuẩn.
LOD – phạm vi tuyến tính	4,75mg /Kg	10mg/kg (Khoảng chia 1ppm) Phạm vi đo: 1-500ppm, sai số 10%.	0.54 - 3.75 mg / kg (ppm) Histamine tùy vào nền mẫu	~ 30mg/Kg
Thời gian cho kết quả	1 giờ / <10 mẫu (phân tích đồng thời)	< 10 phút / 1 mẫu	60- 90 phút (cho nhiều mẫu đồng thời, maximum khoảng 40 mẫu)	1 giờ cho một vài mẫu phân tích đồng thời
Dụng cụ	Các thiết bị xử lý mẫu như máy vortex, máy xay, máy ly tâm, lọ ly tâm, bể ủ nhiệt, …   Hệ thống HPLC	Dụng cụ được chuẩn bị sẵn theo bộ kit: xylanh nhựa chứa sẵn đệm và đầu lọc, típ nhựa pp đựng mẫu, pipet hút mẫu. chip cảm biến Máy đo Comilu	•Máy xay, vortex • Bể ổn nhiệt có thể đun và ổn nhiệt ở 95 ± 5oC • Máy ly tâm • Máy đọc đĩa ELISA có bước sóng 450nm • Bộ Micropipette  • Multistepper pipette • Ống ly tâm	Máy xay, vortex, máy ly tâm, lọ ly tâm, micropipette, nồi hấp cách thủy, lọ pp, giấy lọc,   Máy đo huỳnh quang
Ưu điểm	Độ chính xác cao, giới hạn phát hiện thấp.	Enzyme hoạt động mạnh cải thiện độ nhạy và hiệu suất thu hồi. Độ chính xác và độ tái lặp cao và ổn định Giảm chi phí vận hành. Không cần nhân sự trình độ cao	Độ chính xác tương đương với pp HPLC, giới hạn phát hiện thấp. Phương pháp đã được hiệu lực hóa theo AOAC Phương pháp vận hành đơn giản, Hóa chất được chuẩn bị sẵn theo bộ kit (hầu hết) Đo được nhiều mẫu 1 lần. Cần nhân sự đào tạo cơ bản.	Độ chính xác cao, giới hạn phát hiện tương đối thấp, Phương pháp đã chuẩn hóa theo TCVN Chi phí trang bị thiết bị phân tích rẽ hơn hệ HPLC
Nhược điểm	Chi phí đầu tư ban đầu cao. Thời gian đo lâu (mỗi lần đo 1 mẫu). Cần nhân sự đào tạo chuyên sâu	Giới hạn phát hiện cao.	Cần loại acid ascorbic khi phân tích Cần thêm 1 số máy móc phụ trợ và máy đo quang để đọc kết quả	Nhiều thao thác thực hiện, yêu cầu thực hiện nhanh chóng, cần tự chuẩn bị hóa chất (tinh khiết) Giới hạn số mẫu phân tích 1 lần
Ứng dụng trong	Trung tâm kiểm nghiệm kỹ thuật cao	Tại hiện trường	Trung tâm kiểm nghiệm. phân tích chuyên nghiệp, phòng QAQC của các cty sản xuất (lab thủy sản, nước mắm, rượu,…)	Trung tâm kiểm nghiệm. phân tích chuyên nghiệp, phòng QAQC của các cty sản xuất (lab thủy sản, nước mắm, rượu,…)
Chứng nhận			AOAC-RI 031901	TCVN 11047:2015

Như vậy, có thể thấy so với các phương pháp định lượng chính xác kỹ thuật cao, các phương pháp test nhanh histamine mà pacificlab cung cấp có các ưu điểm nhất định, chẳng hạn như thời gian phân tích nhanh, hóa chất (nếu có) đã được chuẩn bị sẵn, số mẫu phân tích được trong cùng 1 đơn vị thời gian lớn. Qua đó giải quyết được yêu cầu: nhanh - chính xác - tiết kiệm chi phí cho người dùng. 
 *Để biết thêm chi tiết về các sản phẩm này, vui lòng liên hệ đội ngũ kỹ thuật viên của Pacificlab