ELISA là kỹ thuật phát hiện đơn giản, hiệu quả về chi phí và khá phổ biến hiện nay trên thị trường. Có rất nhiều loại kit ELISA và nhà sản xuất kit khác nhau. Vậy làm sao lựa chọn đúng nhà cung cấp phù hợp nhu cầu của bạn?
ELISA assay kit
10 lưu ý để chọn đúng bộ kit ELISA
ELISA là kỹ thuật phát hiện đơn giản, hiệu quả về chi phí và khá phổ biến hiện nay trên thị trường. Nó còn được gọi là xét nghiệm miễn dịch enzym (EIA). Xét nghiệm này sử dụng các enzym, kháng thể và kháng nguyên để xác định các chất trong mẫu lỏng, chẳng hạn như huyết tương hoặc huyết thanh. Đối với mẫu rắn, tiến hành chiết các chất phân tích từ nền mẫu bằng dung dịch đệm hoặc dung môi thích hợp và tiến hành phân tích. (Xem thêm các kỹ thuật ELISA và những điều lưu ý)
Đơn giản nhất trong quá trình ELISA, chất phân tích được giữ lại trên bề mặt rắn. Sau đó, tất cả các tạp chất khác trong mẫu được loại bỏ bằng dung dịch rửa. Điều này cho phép tách chất phân tích ra khỏi nền mẫu. Sau đó, kháng thể phát hiện, lúc này đã được liên kết với enzym, được thêm vào để tạo thành sự kết hợp kháng thể-kháng nguyên. Bước cuối cùng là thêm một cơ chất để phản ứng với enzyme (trên kháng thể phát hiện). Phản ứng này thường tạo ra tín hiệu màu sắc và thường đo phổ biến ở bước sóng 450nm.
Nhiều phương pháp ELISA ra đời để đáp ứng nhu cầu phân tích các chỉ tiêu khác nhau như phương pháp ELISA cạnh tranh, phương pháp ELISA gián tiếp, phương pháp ELISA Sandwich,… Vậy đâu là cơ sở để bạn lựa chọn đúng bộ kit elisa mà mình cần
1. Các loài đã nghiên cứu ứng dụng
Mẫu thử thông thường có được từ nhiều nguồn mẫu khác nhau như chuột, chuột cống và người. Ba nguồn mẫu này là những nguồn phổ biến hơn cả và việc tìm kiếm một bộ kit ELISA đã hiệu lực hóa/kiểm chứng cho chúng khá đơn giản. Mặt khác, nếu nguồn mẫu không phổ biến, chẳng hạn như khỉ, số lượng bộ kit ELISA có sẵn sẽ giảm xuống. Hoặc đối với các mẫu hiếm, bạn phải chọn một bộ kit đã được thẩm định cho các loài tương đồng khác.
2. Bản chất của chất phân tích
Với các chất phân tích có bản chất là protein (điển hình là các protetin gây dị ứng trong trứng sữa,…). Bạn phải hiểu rõ bản chất của chúng trước khi phân tích chúng. Bộ kit ELISA sandwich được biết đến là thường thích hợp cho việc phát hiện các protein lớn với nhiều biểu mô như cytokine. Mặt khác, bộ kit ELISA cạnh tranh, rất phù hợp để phát hiện các phân tử nhỏ, chẳng hạn như hapten.
Trong phân tích các chất trong huyết tương bằng ELISA. Bạn cần đọc kỹ hướng dẫn sử dụng sản phẩm để đảm bảo bộ sản phẩm phù hợp với mẫu của bạn. Vì phương pháp thu thập mẫu huyết tương có thể ảnh hưởng đến loại kit ELISA bạn chọn. Ngoài ra, các khía cạnh khác như hàm lượng lipid trong mẫu, quá trình phá hủy hồng cầu,… có thể làm ảnh hưởng hiệu suất của xét nghiệm ELISA.
Hàm lượng lipid dễ gây dương tính giả. Với các bộ kit ELISA chưa có quy trình loại béo, có thể sẽ không tương thích với nhu cầu của bạn. Do đó bạn cần cân nhắc những yếu tố này trước khi chọn đúng bộ ELISA cho mình.
3. Có mục đích phân tích rõ ràng
Kit ELISA là công cụ có thể được sử dụng cho cả phân tích định lượng và định tính. ELISA định lượng cho biết nồng độ của chất phân tích trong mẫu thông qua đường cong chuẩn, trong khi ELISA định tính cho kết quả âm tính hoặc dương tính đơn giản đối với mẫu được kiểm tra.
Kit test nhanh sars-cov-2 (covid-19) là một ví dụ điển hình của Kit ELISA test nhanh định tính
Bạn phải biết liệu bạn muốn định lượng chất phân tích trong mẫu của mình hay chỉ đơn giản là phát hiện sự vắng mặt hoặc hiện diện của nó. Có mục tiêu phân tích rõ ràng sẽ giúp bạn lựa chọn giữa ELISA định tính và định lượng.
4. Loại kháng thể kit ELISA sử dụng
Các bộ Kit ELISA khác nhau sử dụng các kháng thể khác nhau. Nó có thể là kháng thể đơn dòng hoặc kháng thể đa dòng. Trong ELISA sandwich, đôi khi có cả hai, kháng thể đa dòng để bắt giữ và một kháng thể đơn dòng để phát hiện.
Một kháng nguyên có nhiều điểm (epitope) để kháng thể bám vào gọi là kháng nguyên đa trị. Những loại kháng thể bám vào các epitope của kháng nguyên đa trị gọi là Kháng thể đa dòng. Trái với kháng thể đa dòng, các kháng thể đơn dòng chỉ nhận biết một epitope đặc hiệu trên một kháng nguyên cho sẵn.
Kháng thể được sản xuất bằng cách tiêm dung dịch chứa kháng nguyên mong muốn vào vật mẫu (thỏ, dê, cừu, chuột…). Sau đó lấy máu từ vật thí nghiệm và tiến hành tách huyết thanh (kháng huyết thanh).
Hybridomas - Phương pháp tạo kháng thể cho kit ELISA từ chuột
Thuốc thử làm từ kháng thể đơn dòng cho độ đặc hiệu tốt, độ ổn định cao. Tuy nhiên giá thành cũng là một vấn đề cho các bộ kit ứng dụng dòng kháng thể này. Và không phải nhà cung cấp nào cũng sử dụng chúng. Các sản phẩm kit ELISA của R-Biopharm luôn đảm bảo độ ổn định và độ đặc hiệu của kit thử.
5. Độ nhạy cần thiết của Kit ELISA
Nếu bạn không chắc chắn về nồng độ của chất phân tích trong mẫu của mình ở mức (khoảng) nào, một số bộ kit ELISA có phạm vi phát hiện rộng sẽ đáp ứng nhu cầu của bạn. Tuy nhiên, nếu nồng độ của chất phân tích trong mẫu quá thấp, thì lựa chọn bộ kit ELISA với độ nhạy cao là cách tốt nhất.
6. Máy đọc ELISA
Có nhiều phương pháp đọc trong ELISA, chẳng hạn như máy đo huỳnh quang, đo màu và phát quang. Tất cả ELISA đều đòi hỏi sự cố định của chất phân tích trên bề mặt giếng, enzyme đánh dấu và chất nền phù hợp. Nếu bạn đang sở hữu 1 hệ thống đọc ELISA bằng đo huỳnh quang. Bạn cần chọn kit ELISA có cơ chất và enzyme tạo phản ứng huỳnh quang. Tương tự cho các loại máy đọc khác.
Thiết bị ELISA tự động Thunder Bolt có thể trang bị tùy chọn chemiluminescence bao gồm đầu đọc chemiluminescence reader phù hợp cho cả 2 phương pháp phân tích EIA và CLIA.
7. Tính chọn lọc của Kit ELISA
Một trong những hạn chế lớn của việc thực hiện ELISA là phản ứng chéo và thu được kết quả dương tính giả. Điều này xảy ra khi các kháng thể tự gắn vào phân tử khác chứ không phải chất phân tích dự kiến. Khi bạn đang tìm kiếm bộ ELISA, hãy nhớ kiểm tra dữ liệu phản ứng chéo do nhà sản xuất cung cấp. Trong trường hợp nền mẫu của bạn thường xuyên chứa chất có phản ứng chéo với chỉ tiêu mong muốn kiểm tra. Phép đo của bạn sẽ có giá trị tin cậy thấp.
8. Dựa vào tài liệu tham khảo
Bộ kit ELISA được sử dụng trong các nghiên cứu khác trước đây và đã đạt được thành công cũng có thể giúp bạn trong thực hiện xét nghiệm của mình. Nếu số liệu thực nghiệm về bộ Kit ELISA đó đã được báo cáo trong tài liệu, có khả năng lớn là chúng đáng tin cậy. Ngoài ra, các bộ dụng cụ và nhà sản xuất có chứng nhận cũng đáng tin cậy hơn.
9. Kích thước mẫu
Bộ dụng cụ ELISA thường yêu cầu thể tích mẫu từ 10µl đến 100µl mẫu. Nếu lượng mẫu của bạn rất ít hoặc mẫu của bạn rất quý, tốt hơn bạn nên chọn các bộ ELISA yêu cầu lượng mẫu ít hơn. * Lưu ý 1ml = 1000µl
10. Giá thành
Cuối cùng, giá cả luôn là một yếu tố quan trọng để lựa chọn, đặc biệt là khi ngân sách của bạn có hạn. Bộ kit ELISA thường là 96 giếng, cũng có những bộ quy cách đóng gói 48 giếng. Chi phí vận chuyển cũng nên được xem xét trong trường hợp nhà cung cấp ở xa bạn.
Trên đây là 9 lưu ý giúp bạn chọn được bộ kit phù hợp cho mình. Chúng tôi hy vọng bài viết này hữu ích cho bạn. R-biopharm với nhiều bộ kit ELISA đạt chứng nhận AOAC, độ ổn định cao là một trong những loại kit ELISA đáng tin cậy. Tùy vào mục đích thực nghiệm của mình, bạn có thể chọn được dòng sản phẩm mong muốn khi tìm kiếm sản phẩm này ở website chúng tôi hoặc lien hệ đội ngũ sale để được tư vấn thêm.
CÔNG TY TNHH THIẾT BỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT THÁI BÌNH DƯƠNG
VPGD: Số 28 Đường Số 20, KDC Him Lam, P.Tân Hưng, Q.7, HCM
028 62 65 46 83
sales@pacificlab.vn
