Ưu và nhược điểm của các kỹ thuật ELISA cạnh tranh - gián tiếp - trực tiếp - sandwich. Lựa chọn Elisa test kit nhanh phù hợp cho nền mẫu và mục đích xét nghiệm.
Trong bài viết trước chúng tôi đã phân tích rõ sự khác nhau giữa các kỹ thuật ELISA.
Phần này, các ưu nhược điểm của phương pháp Elisa cụ thể sẽ được trình bày rõ hơn.
1. Phương pháp ELISA Trực tiếp
Ưu điểm :
Đơn giản và nhanh chóng - chỉ cần một kháng thể duy nhất và quy trình làm việc chỉ bao gồm một vài bước.
Ít sai số hơn - số lượng bước pipet tương đối nhỏ so với các phương pháp ELISA khác,
chỉ có một kháng thể nên hầu như không có nguy cơ xảy ra phản ứng chéo kháng thể.
Nhược điểm của phương pháp:
Độ nhạy hạn chế do không có bước khuếch đại tín hiệu.
Quá trình phát triển bộ KIT xét nghiệm tốn thời gian - mỗi mục tiêu xét nghiệm yêu cầu một kháng thể sơ cấp liên hợp enzyme cụ thể,
điều này cũng có thể làm cho xét nghiệm tương đối tốn kém.
Tính linh hoạt thấp: Sự gắn kết của enzym vào kháng thể có thể hạn chế
(do sự sẵn có về không gian của các vị trí trên kháng thể sẽ liên kết với kháng nguyên là hạn chế) Nhiễu nền cao do tất cả các protein trong mẫu liên kết với bề mặt.
2. Phương pháp ELISA gián tiếp
Kỹ thuật elisa gián tiếp
Ưu điểm :
Tính linh hoạt cao: cùng một kháng thể thứ cấp có thể được sử dụng cho nhiều loại kháng thể sơ cấp Độ nhạy cao - nhiều hơn một kháng thể được đánh dấu có thể liên kết với kháng thể chính Phản ứng miễn dịch chọn lọc cao - không có nhiễu can thiệp vào các vị trí trên kháng thể chính. Kinh tế - yêu cầu ít loại kháng thể đánh dấu (gắn enzyme)
Nhược điểm :
Quy trình làm việc phức tạp hơn - cần có thêm một bước ủ cho kháng thể thứ cấp. Khả năng phản ứng chéo - tín hiệu không đặc hiệu do phản ứng chéo với kháng thể thứ cấp.
3. Phương pháp ELISA sandwich
(1) Đĩa được phủ một lớp kháng thể bắt giữ; (2) Thêm mẫu, bất kì kháng nguyên nào có mặt sẽ liên kết với kháng thể bắt giữ; (3) Kháng thể phát hiện được thêm vào; (4) Kháng thể thứ cấp liên kết enzyme được thêm vào, và gắn với kháng thể phát hiện; (5) Thêm cơ chất của enzyme và phát tín hiệu.
Ưu điểm :
Tính linh hoạt và độ nhạy cao: có thể sử dụng cả phương pháp trực tiếp (đơn lớp) và gián tiếp (hai lớp). Độ đặc hiệu cao - hai kháng thể được sử dụng để phát hiện kháng nguyên. Thích hợp cho các mẫu phức tạp - không yêu cầu phải tinh sạch kháng nguyên trước khi đo.
Nhược điểm :
Quy trình làm việc phức tạp - yêu cầu nhiều bước ủ hơn so với các định dạng ELISA khác.
Quy trình phát triển KIT phức tạp – do phải kiểm tra phản ứng chéo giữa các kháng thể khác nhau
4. Phương pháp ELISA cạnh tranh
Ưu điểm :
Tính linh hoạt cao nhất - có thể dựa trên định dạng ELISA trực tiếp, gián tiếp hoặc sandwich Độ đặc hiệu cao nhất - kháng nguyên được bắt và phát hiện cụ thể Khuếch đại tín hiệu mạnh - giảm thiểu ảnh hưởng của việc pha loãng mẫu và hiệu ứng nền mẫu
Nhược điểm :
Khá tốn thời gian – quy trình phức tạp
Phụ thuộc nhược điểm của định dạng phát hiện đã chọn
Mỗi một hãng sản xuât KIT test ELISA (xét nghiệm dư lượng kháng sinh, dị ứng, hóc môn, độc tố,...) sẽ có các kỹ thuật ELISA riêng biệt. Tùy thuộc độ nhạy yêu cầu, độ phức tạp của nền mẫu, khi chọn mua KIT ELISA bạn cũng nên lưu ý kỹ xem kỹ thuật mà nhà cung cấp lựa chọn là gì, có phù hợp tiêu chí xét nghiệm của mình hay không.
Các yếu tố giá thành, độ ổn định, độ nhạy, thời gian phân tích,... đều bị chi phối bởi phương pháp ELISA mà KIT đó áp dụng. Do đó, bạn không nên bỏ qua tiêu chí quan trọng này khi lựa chọn KIT thử.
Cty Thiết bị KHKT Thái BÌnh Dương, đại diện phân phối dộc quyền nhiều loại kit ELISA với các phương pháp ELISA khác nhau mang lại độ nhạy và độ ổn định cao.
Để tư vấn các Kit loại test kit cụ thể cho từng chỉ tiêu. Vui lòng liên hệ:
CÔNG TY TNHH THIẾT BỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT THÁI BÌNH DƯƠNG
Trụ sở: Tầng 3, Số 382/17-19 Nguyễn Thị Minh Khai, P.5, Q.3, HCM
VPGD: Số 28 Đường Số 20, KDC Him Lam, P.Tân Hưng, Q.7, HCM
028 62 65 46 83
sales@pacificlab.vn
