Hệ số biến thiên CV trong ELISA

Đối với kỹ thuật test ELISA, hệ số biến thiên - Coefficient of variation (CV) thấp giữa các lần lặp mẫu là rất quan trọng để chứng minh một xét nghiệm đã được vận hành tốt và dữ liệu kết quả có độ chính xác cao.
Nếu các kết quả phân tích của bạn tương tự nhau và số lần lặp đủ lớn, thì các tổng thể mẫu có thể được đánh giá bằng cách sử dụng độ lệch chuẩn; khi các kết quả phân tích khác nhau nhiều, bạn phải xem xét % CV, để đánh giá độ chính xác của kỹ thuật trong phòng thí nghiệm.
CV được tính bằng cách chia độ lệch chuẩn (σ) của một tập hợp các phép đo cho giá trị trung bình (µ) của tập hợp, sau đó được biểu thị bằng phần trăm biến thiên so với giá trị trung bình 

Có hai loại %CV được sử dụng là %CV trong xét nghiệm (Intra-assay CV) và CV giữa các xét nghiệm (inter-assay).

- CV trong xét nghiệm: đo sai lệch OD cùng 1 đĩa. (độ lặp lại)
- CV giữa các xét nghiệm: đo sai lệch giữa các lần lặp lại mẫu trên các giếng khác nhau. (độ tái lặp)

Thông thường để đánh giá độ tin cậy tổng thể của các kết quả xét nghiệm miễn dịch của bạn, % CV giữa các xét nghiệm phải nhỏ hơn 15% và % CV trong một xét nghiệm phải nhỏ hơn 10%.
 

CV trong kỹ thuật ELISA cao thường đến chủ yếu từ các nguyên nhân sau:

- Lỗi thao tác kỹ thuật : kỹ thuật dùng pipet không chính xác, thuốc thử văng giữa các giếng, để giếng bị khô, ướt không đồng nhất, xử lý mẫu không nhất quán, thêm lượng thuốc thử không đều tay, việc cấp/rã đông làm mẫu không đồng nhất….
- Lỗi của thiết bị sử dụng: pipet tự động chưa được hiệu chuẩn, đầu đọc đĩa chưa hiệu chuẩn, cài đặt phần mềm đọc kết quả không phù hợp.
- Hóa chất, thuốc thử bị nhiễm bẩn cũng có thể dẫn đến% CV cao.

- Sử dụng đầu tip pipet mới cho mỗi lần thêm/rút hóa chất, mẫu, ngăn ngừa nhiễm chéo giữa các giếng và việc đầu típ bị thấm ướt khi tái sử dụng. Điều này giữ cho nền và % CV thấp giữa các lần lặp mẫu của bạn.
- Không nên đổ thuốc thử/ hóa chất dư trở lại chai ban đầu vì điều này có thể vô tình làm nhiễm bẩn thuốc thử/ hóa chất gốc của bạn.
- Về kỹ thuật, làm ướt đầu pipet trước 2-3 lần trong dung dịch được hút cũng có thể giúp cải thiện % CV. Khi hút dung dịch, cần giữ pipet thẳng đứng, khi hút, cần hút từ từ, để đầu típ chạm vào bình khi rút ra Pipet cần được hiệu chuẩn thường xuyên.
- Máy rửa, máy đọc ELISA cũng cần được bảo trì và hiệu chuẩn lại thường xuyên.
- Trong quá trình ủ, cần đảm bảo các đĩa được ủ trong môi trường kín, không có đối lưu nhằm giảm thiểu sự thay đổi nhiệt độ trên đĩa và đảm bảo sự phân bố nhiệt đồng đều giữa các giếng. Các đĩa nên được đậy kín bằng giấy bạc để ngăn giếng bị khô, tránh ánh sáng.
- Trong quá trình rửa, cần duy trì cùng một quy trình rửa từ giếng này sang giếng khác để giảm thiểu %CV giữa các lần xét nghiệm. Cần tối ưu hóa số chu kỳ rửa. Thông thường, lặp lại bước rửa ba lần sau mỗi bước ủ. Có thể sử dụng máy rửa để đồng bộ giữa các giếng. Cần lưu ý: lượng dung dịch rửa cho mỗi giếng cần lớn hơn tổng lượng mẫu/ thuốc thử/chuẩn trong mỗi giếng mỗi lần ủ.