1. Chuẩn bị mẫu

– Nghiền mẫu: Mẫu thực phẩm cần được nghiền nhỏ để đảm bảo tính đồng nhất.

– Cân mẫu: Cân một lượng mẫu theo hướng dẫn của kit ELISA (thường từ 5-25g, tùy thuộc vào loại mẫu và mycotoxin cần kiểm tra).

– Chiết xuất: Mẫu được tách chiết bằng dung dịch chiết (thường là methanol: nước hoặc acetonitrile: nước với tỷ lệ phần trăm cụ thể). Ví dụ, đối với aflatoxin, thường sử dụng dung dịch methanol: nước (70:30).

– Lắc hoặc khuấy: Để đảm bảo mycotoxin được chiết ra khỏi mẫu, dung dịch cần được khuấy hoặc lắc đều trong một thời gian quy định (thường từ 10-30 phút).

– Lọc hoặc ly tâm: Sau khi chiết xuất, hỗn hợp cần được lọc hoặc ly tâm để loại bỏ tạp chất và cặn. Dung dịch lọc sẽ được dùng cho bước tiếp theo.

2. Pha loãng mẫu

Pha loãng mẫu đã chiết với dung dịch đệm pha loãng (Dilution buffer) do R-Biopharm cung cấp, theo hướng dẫn cụ thể của từng loại kit ELISA. Bước này giúp điều chỉnh nồng độ mycotoxin trong khoảng có thể đo được.

3. Chuẩn bị bộ kit ELISA

– Chuẩn bị khay ELISA: Khay ELISA của R-Biopharm đã được phủ sẵn các kháng thể đặc hiệu với mycotoxin cần kiểm tra (ví dụ: Aflatoxin, Ochratoxin, Fumonisin, Zearalenone, T-2/HT-2 toxin).

– Thêm dung dịch chuẩn: Pha các dung dịch chuẩn mycotoxin với nồng độ đã biết vào các giếng riêng biệt của khay ELISA để tạo đường chuẩn.

– Thêm mẫu chiết: Thêm mẫu đã pha loãng vào các giếng còn lại trên khay ELISA.

4. Ủ mẫu

– Sau khi thêm dung dịch chuẩn và mẫu, khay ELISA được ủ trong một khoảng thời gian nhất định (thường là 30 phút đến 1 giờ) ở nhiệt độ phòng hoặc trong lò ủ (tùy thuộc vào hướng dẫn của kit).

– Trong quá trình này, các kháng thể trong giếng sẽ bắt cặp với mycotoxin có trong mẫu (nếu có).

5. Rửa khay

Sau khi ủ, khay ELISA sẽ được rửa bằng dung dịch rửa (Wash buffer) để loại bỏ các chất không gắn kết với kháng thể. Bước rửa được thực hiện nhiều lần (thường 3-5 lần) để đảm bảo loại bỏ hoàn toàn các tạp chất.

6. Thêm enzyme và cơ chất

– Thêm enzyme gắn với kháng thể thứ hai: Thêm enzyme conjugate (ví dụ như enzyme peroxidase) vào các giếng. Enzyme này sẽ gắn với phức hợp kháng thể mycotoxin.

– Ủ tiếp: Khay ELISA tiếp tục được ủ để cho phép phản ứng enzyme diễn ra (thường 15-30 phút).

– Thêm cơ chất (substrate): Sau khi ủ, thêm dung dịch cơ chất (chromogen/substrate) vào các giếng. Cơ chất sẽ phản ứng với enzyme và tạo ra màu sắc (thường là màu xanh).

7. Dừng phản ứng

Thêm dung dịch dừng phản ứng (Stop solution): Sau thời gian ủ nhất định, dung dịch dừng phản ứng (thường là acid sulfuric hoặc tương tự) được thêm vào các giếng để dừng phản ứng enzyme. Màu sắc sẽ chuyển từ xanh sang vàng.

8. Đọc kết quả

– Đọc mật độ quang học (OD): Sử dụng máy đọc ELISA (ELISA reader) để đo mật độ quang học (Optical Density - OD) ở bước sóng thích hợp (thường là 450 nm).

– So sánh với đường chuẩn: So sánh giá trị OD của mẫu với đường chuẩn đã xây dựng từ dung dịch chuẩn để xác định nồng độ mycotoxin có trong mẫu.

9. Phân tích và báo cáo

– Tính toán nồng độ mycotoxin: Dựa trên kết quả OD, tính toán nồng độ mycotoxin trong mẫu bằng cách so sánh với đường chuẩn.

– Báo cáo kết quả: Lập báo cáo kết quả và so sánh với các giới hạn an toàn cho phép của mycotoxin trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi.

* Các lưu ý khi thực hiện kỹ thuật ELISA:

– Thực hiện đúng theo hướng dẫn của từng loại kit ELISA, vì thời gian ủ và dung dịch sử dụng có thể khác nhau.

– Đảm bảo các thiết bị và dụng cụ phòng thí nghiệm được làm sạch kỹ lưỡng để tránh nhiễm chéo.

– Mỗi loại kit của R-Biopharm sẽ có quy trình chi tiết hơn và cần phải tuân theo các thông số kỹ thuật do hãng cung cấp.

Kỹ thuật ELISA của R-Biopharm nổi bật với độ nhạy cao, cho phép phát hiện nồng độ mycotoxin thấp và có thể áp dụng cho nhiều loại thực phẩm khác nhau, từ ngũ cốc, hạt đến sản phẩm sữa và thịt. Quý khách hàng vui lòng liên hệ với chúng tôi để được tư vấn và cung cấp sản phẩm phù hợp với quy trình sản xuất!