Trong lĩnh vực sinh học phân tử hiện đại, việc chuẩn hóa các phản ứng PCR đóng vai trò rất quan trọng để đảm bảo độ chính xác và tái lập. Bộ master mix đóng vai trò là "trái tim" của phản ứng PCR, vì nó chứa đầy đủ các thành phần thiết yếu giúp phản ứng diễn ra thuận lợi và ổn định. Một trong những sản phẩm nổi bật hiện nay là Takyon® No ROX Probe 2X MasterMix UNG của hãng Eurogentec – giải pháp lý tưởng cho các ứng dụng PCR định lượng sử dụng đầu dò TaqMan® và tương tự.

1. Quy cách đóng gói

Thông tin dung dịch master mix Takyon® No ROX Probe 2X MasterMix UNG có quy cách chuẩn như sau:

- Thể tích từ 1,5 ml đến 10 x 7,5 ml

- Đóng gói: dạng dung dịch 2X đã pha sẵn, dễ sử dụng

- Bảo quản ở -20°C

- Thành phần chính: 

        + DNA polymerase hoạt tính nóng (hot-start)

        + dNTPs

        + MgCl₂ ở nồng độ tối ưu

        + Buffer phản ứng

        + UNG (Uracil-N-Glycosylase)

        + Không chứa thuốc nhuộm tham chiếu ROX (No ROX)

2. Ứng dụng

Bộ dung dịch master mix này được thiết kế chuyên biệt cho các phản ứng real-time PCR sử dụng đầu dò thủy phân (probe-based PCR) như:

- Kiểm tra virus và vi khuẩn bằng real-time PCR

- Phân tích biểu hiện gen (gene expression analysis)

- Kiểm tra thực phẩm biến đổi gen (GMO detection)

- Phát hiện vi sinh vật gây bệnh trong thực phẩm, nước uống

- Kiểm tra mẫu trong y học chẩn đoán, pháp y và thú y

Với thiết kế không chứa ROX, sản phẩm phù hợp với hầu hết các máy real-time PCR không yêu cầu thuốc nhuộm tham chiếu ROX (như Bio-Rad, Roche LightCycler®, Qiagen Rotor-Gene®, v.v.).

3. Nguyên lý hoạt động

- Takyon® No ROX Probe 2X MasterMix UNG hoạt động dựa trên nguyên lý PCR kết hợp với đầu dò phát huỳnh quang (probe-based). Khi phản ứng diễn ra, đầu dò TaqMan® được thủy phân bởi enzyme Taq polymerase có hoạt tính 5’–3’ exonuclease, giải phóng tín hiệu huỳnh quang – từ đó cho phép định lượng sản phẩm DNA theo thời gian thực.

- Sự hiện diện của UNG (Uracil-N-Glycosylase) là điểm nổi bật giúp loại bỏ nguy cơ nhiễm chéo do amplicon từ các phản ứng trước. UNG phân hủy DNA có chứa uracil, vốn chỉ được sinh ra từ các phản ứng PCR cũ (khi dùng dUTP thay vì dTTP). Quá trình này được kích hoạt ở bước khởi đầu (trước khi enzyme Taq được hoạt hóa), giúp đảm bảo kết quả phản ứng chính xác, không bị ảnh hưởng bởi ô nhiễm.

4. Ưu điểm nổi bật

- Tiết kiệm thời gian: chỉ cần thêm mẫu DNA và đầu dò, không cần chuẩn bị thủ công nhiều thành phần

- Độ nhạy và độ đặc hiệu cao: phù hợp với các ứng dụng yêu cầu phát hiện mục tiêu có nồng độ rất thấp

- Ổn định và tái lập: đảm bảo kết quả đồng nhất giữa các lần chạy

- Tương thích đa nền tảng: không chứa ROX nên dễ tùy biến với các thiết bị PCR khác nhau

Takyon® No ROX Probe 2X MasterMix UNG là một trong những lựa chọn hàng đầu dành cho các nhà nghiên cứu và phòng xét nghiệm cần một giải pháp master mix đáng tin cậy, hiệu quả và linh hoạt. Sản phẩm không chỉ tối ưu hóa quá trình chuẩn bị phản ứng mà còn tăng cường tính an toàn sinh học với cơ chế chống nhiễm chéo thông minh từ UNG. Đây là một ví dụ điển hình cho thấy sự tinh tế trong thiết kế sản phẩm của Eurogentec nhằm phục vụ nhu cầu ngày càng cao trong nghiên cứu và chẩn đoán sinh học phân tử.