Phân tích Aminoglycoside trong thực phẩm bằng sắc ký lỏng – khối phổ tandem sử dụng pha tĩnh zwitterion

• Jinchuan Yang
• Paul D. Rainville
• Waters Corporation

Tóm tắt

Tác động của các điều kiện sắc ký, như pha động, pH và lực ion (hoặc nồng độ dung dịch đệm), đến khả năng phân tách 17 aminoglycoside (AMG) có độ phân cực cao trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC đã được khảo sát có hệ thống. Các AMG trong nghiên cứu gồm Amikacin (AMI), Apramycin (APR), Gentamicin (GEN C1, C1a, C2/C2a), Hygromycin B (HYG), Kanamycin (KAN), Kasugamycin (KAS), Neomycin (NEO), Neamine (hay Neomycin A, NEO A), Paromomycin (PAR), Ribostamycin (RIB), Spectinomycin (SPC), Streptomycin (STP), Dihydrostreptomycin (DSTP), Sisomicin (SIS) và Tobramycin (TOB). Phương pháp rửa giải gradient với hệ pha động hai thành phần gồm dung dịch ammonium formate 20 mM trong nước ở pH 3,0 và acetonitrile chứa 0,1% axit formic cho khả năng phân tách đáng tin cậy, phù hợp và độ nhạy cao khi phân tích các AMG bằng khối phổ tandem ion hóa phun điện (ESI-MS/MS). Mẫu thực phẩm được chiết bằng dung dịch chứa axit trichloroacetic. Quy trình chiết pha rắn (SPE) và làm sạch được tối ưu hóa bằng cột Oasis HLB. Phương pháp được đánh giá trên các mẫu sữa, thịt bò, thịt lợn, gan và mật ong. 16 AMG cho kết quả tốt về độ nhạy, độ đúng và độ chụm. Phương pháp HILIC-ESI-MS/MS tối ưu cuối cùng cho thấy độ tin cậy, độ đúng và độ nhạy phù hợp để xác định AMG trong thực phẩm.

Lợi ích

• Phân tách đáng tin cậy 17 aminoglycoside bằng cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC
• Phương pháp HILIC-MS/MS có độ nhạy cao, đáp ứng yêu cầu quản lý tại các thị trường lớn
• Xác định AMG chính xác và đáng tin cậy trong sữa, thịt, gan và mật ong
• Pha động phù hợp với MS, không cần thuốc thử tạo cặp ion hoặc dung dịch đệm nồng độ cao

Giới thiệu

Aminoglycoside (AMG) là một nhóm kháng sinh quan trọng, được sử dụng rộng rãi trong y học người và thú y để điều trị nhiễm khuẩn Gram âm. Việc sử dụng AMG ngoài hướng dẫn trong chăn nuôi, chẳng hạn không tuân thủ thời gian ngừng thuốc sau điều trị, có thể dẫn đến tồn dư AMG ở mức cao trong thực phẩm. AMG hiện diện trong thực phẩm có thể gây rủi ro cho sức khỏe người tiêu dùng do độc tính, khả năng gây dị ứng và khả năng góp phần làm gia tăng tình trạng kháng kháng sinh. Vì vậy, cần theo dõi hàm lượng AMG trong thực phẩm để bảo đảm sử dụng thuốc đúng cách và an toàn thực phẩm. Nhiều quốc gia và tổ chức quốc tế đã thiết lập giới hạn dư lượng tối đa (MRL) đối với AMG trong thực phẩm có nguồn gốc động vật (xem Bảng 1).¹–⁵

AMG là các hợp chất phân cực, tan trong nước. Tác nhân tạo cặp ion đã được sử dụng thành công trong sắc ký lỏng pha đảo để phân tích AMG.⁶˒⁷ Tuy nhiên, do các vấn đề thực tiễn như thời gian cân bằng kéo dài và khả năng ảnh hưởng bất lợi đến các ứng dụng khác không sử dụng cặp ion, cách tiếp cận này còn hạn chế. Một lựa chọn khác là phân tích AMG bằng sắc ký lỏng tương tác ưa nước (HILIC), nhưng pha tĩnh HILIC dạng amide hoặc aminopropyl cho độ chọn lọc phân tách các hợp chất này còn hạn chế.⁹ Các nghiên cứu cho thấy pha tĩnh zwitterion có độ phân giải tốt hơn khi phân tách AMG so với cột amide hoặc aminopropyl. Tuy nhiên, một số cột HILIC zwitterion cần nồng độ đệm pha động cao (đến 175 mM), không thuận lợi cho phân tích LC-MS.⁹

Trong nghiên cứu này, cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC có pha tĩnh sulfoalkylbetaine zwitterion trên hạt BEH được đánh giá để phân tích 17 AMG trong thực phẩm bằng khối phổ tandem ion hóa phun điện (ESI-MS/MS). Các AMG được khảo sát gồm Amikacin (AMI), Apramycin (APR), Gentamicin (GEN C1, C1a, C2/C2a), Hygromycin B (HYG), Kanamycin (KAN), Kasugamycin (KAS), Neomycin (NEO), Neamine (hay Neomycin A, NEO A), Paromomycin (PAR), Ribostamycin (RIB), Spectinomycin (SPC), Streptomycin (STP), Dihydrostreptomycin (DSTP), Sisomicin (SIS) và Tobramycin (TOB). Cấu trúc của các AMG được trình bày ở Hình 1. Ảnh hưởng của điều kiện sắc ký đến khả năng phân tách và phát hiện AMG được đánh giá có hệ thống. Quy trình chiết pha rắn và làm sạch vốn được sử dụng cho STP, DSTP, GEN và NEO được điều chỉnh và tối ưu hóa.¹⁰ Hiệu năng phương pháp được đánh giá trên các mẫu sữa, thịt, gan và mật ong.

Bảng 1. Giới hạn dư lượng tối đa (MRL) của AMG trong thực phẩm có nguồn gốc động vật theo quốc gia và tổ chức.

Hình 1. Cấu trúc các AMG trong nghiên cứu. Gentamicin có 4 đồng phân: C1, C1A, C2 và C2A.

Thực nghiệm

Tất cả mẫu thực phẩm và chất chuẩn AMG được chuẩn bị bằng dụng cụ, vật chứa bằng polypropylene (PP) hoặc nhựa.

Hóa chất và dung dịch

Amikacin, hygromycin B, ribostamycin sulfate, sisomicin sulfate, gentamicin sulfate, neomycin trisulfate salt hydrate, tobramycin sulfate và kanamycin sulfate được mua từ Sigma–Aldrich (Allentown, Pennsylvania, Hoa Kỳ). Neamine (hay neomycin A) hydrochloride, apramycin sulfate, kasugamycin hydrochloride, streptomycin sulfate, paromomycin sulfate, dihydrostreptomycin sulfate và spectinomycin dihydrochloride hydrate được mua từ Cayman Chemical (Ann Arbor, Michigan, Hoa Kỳ). GEN gồm hỗn hợp bốn thành phần: GEN C1, C1a, C2 và C2a. GEN C2 và C2a là các đồng phân lập thể. Cấu trúc của các AMG này được trình bày ở Hình 1.

Dung dịch chuẩn gốc AMG (1 mg/mL) được chuẩn bị bằng cách hòa tan chất chuẩn trong nước khử ion (>18,2 MΩ·cm). Hỗn hợp dung dịch chuẩn làm việc được pha bằng cách trộn và pha loãng các dung dịch chuẩn gốc với nước khử ion. Tất cả dung dịch được bảo quản trong vật chứa PP ở tủ đông (-20 °C). AMI được sử dụng làm chất chuẩn nội (IS).

Dung dịch chiết chứa ammonium acetate 10 mM, axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA) 0,4 mM, NaCl 0,5% và axit trichloroacetic (TCA) 2% được chuẩn bị như sau: cho 0,385 g ammonium acetate vào bình định mức 500 mL. Thêm khoảng 450 mL nước khử ion và hòa tan. Điều chỉnh pH đến 4,0 bằng axit formic (FA), sau đó thêm 0,074 g disodium ethylenediaminetetraacetate dihydrate, 2,5 g natri clorua và 10 g TCA. Trộn đến khi hòa tan hoàn toàn rồi thêm nước khử ion đến vạch.

Mô tả mẫu

Các mẫu sữa, mô cơ (thịt bò và thịt lợn), gan (gia cầm) và mật ong được mua tại các cửa hàng địa phương. Mật ong được đưa vào nghiên cứu vì AMG được sử dụng để điều trị nhiễm khuẩn ở ong mật. Các mẫu mật ong và sữa được bảo quản trong tủ lạnh (0–4 °C), còn mẫu mô cơ và gan được bảo quản trong tủ đông (-20 °C).

Chiết mẫu và làm sạch

Trộn 3 g mật ong, sữa, thịt đã xay hoặc mô gan băm nhỏ với 20 mL dung dịch chiết trong ống ly tâm PP 50 mL. Lắc vortex tốc độ cao (3.200 vòng/phút) trong 2 phút, sau đó đặt trong tủ lạnh 30 phút. Vortex lại rồi ly tâm ở 3.200 g trong 10 phút tại 4 °C. Dùng pipet chuyển mẫu bằng nhựa chuyển toàn bộ phần dịch nổi sang một ống ly tâm PP 50 mL khác. Trước khi chiết pha rắn (SPE) và làm sạch, dùng máy đo pH đã hiệu chuẩn để điều chỉnh dịch nổi đến pH 6,75 ± 0,25 bằng dung dịch KOH 50% và 10%. Cột SPE Oasis HLB (cột chân không 6 cc, 500 mg chất hấp phụ, 60 µm; mã sản phẩm 186000115) được hoạt hóa và cân bằng lần lượt bằng 3 mL methanol và 3 mL nước khử ion trước khi nạp toàn bộ dịch nổi (khoảng 18 mL). Sau khi nạp mẫu, rửa cột bằng 3 mL nước khử ion và làm khô dưới chân không trong 15 phút. Rửa giải các chất phân tích bằng 3 mL dung dịch rửa giải (10% thể tích FA và 5% thể tích isopropanol trong nước). Dịch chiết cuối được phân tích bằng LC–MS/MS mà không hoàn nguyên hoặc pha loãng. Cả bộ manifold chiết chân không Waters (186008998) và manifold áp suất dương Otto SPEcialist (725000682) đều được sử dụng trong quy trình làm sạch SPE và cho kết quả tương đương. Kết quả tương đương cũng thu được khi sử dụng cột Oasis PRiME HLB (mã sản phẩm 186008718) mà không cần các bước hoạt hóa và cân bằng.

Điều kiện sắc ký lỏng (LC)

Bảng chương trình gradient

Điều kiện khối phổ (MS)

Bảng 2. Các chuyển tiếp MRM, điện áp cone và thông số năng lượng va chạm được sử dụng trong nghiên cứu. Các chuyển tiếp MRM dùng để định lượng được in đậm.

Kết quả và thảo luận

1. Phân tách AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC

Hàm lượng nước trong pha động, pH và nồng độ dung dịch đệm là những yếu tố chính khi tối ưu hóa phép tách AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC.

1.1. Ảnh hưởng của hàm lượng pha nước trong pha động

Hình 2 cho thấy ảnh hưởng của hàm lượng nước trong pha động đến thời gian lưu (RT) của một số AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC (2.1 x 100 mm, 1.7 μm) khi rửa giải đẳng dòng. Pha động A là dung dịch ammonium formate 20 mM trong nước ở pH 3.0, còn pha động B là acetonitrile chứa 0.1% FA. Hình 2 cho thấy hàm lượng nước trong pha động càng cao thì các chất rửa giải càng nhanh (RT càng nhỏ).

Hình 2. Ảnh hưởng của hàm lượng pha nước trong pha động đến thời gian lưu của các AMG được chọn trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC.

1.2. Ảnh hưởng của pH pha động

Hình 3 cho thấy ảnh hưởng của pH pha động A đến RT của một số AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC (2.1 x 100 mm, 1.7 μm) khi rửa giải gradient: tăng tỷ lệ pha động A từ 20% lên 95% trong 5 phút, sau đó giữ ở 95% A trong 10 phút. Pha động A là dung dịch ammonium formate 20 mM trong nước với các giá trị pH khác nhau; pha động B là acetonitrile chứa 0.1% FA. Lưu lượng là 0.2 mL/phút và nhiệt độ cột là 40 °C. Hình 3 cho thấy các AMG rửa giải muộn phụ thuộc nhiều hơn vào pH. Ở pH cao, các AMG (là những bazơ yếu) ít bị ion hóa hơn và có tương tác kỵ nước mạnh hơn với pha tĩnh, dẫn đến RT lớn hơn. Hình dạng pic, cường độ pic và độ phân giải cũng chịu ảnh hưởng của pH pha động. Hình 4 trình bày sắc ký đồ của một số AMG trong cùng điều kiện như Hình 3. Khi pH giảm từ 9 xuống 3, các pic, đặc biệt là những pic rửa giải muộn, trở nên hẹp hơn, đối xứng hơn, có cường độ cao hơn và được phân giải tốt hơn.

Hình 3. Ảnh hưởng của pH đến thời gian lưu (RT) của các AMG được chọn trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC.

Hình 4. Ảnh hưởng của pH pha nước trong pha động đến thời gian lưu, hình dạng pic và cường độ pic của các AMG được chọn trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC.

1.3. Ảnh hưởng của nồng độ dung dịch đệm

Hình 5 cho thấy ảnh hưởng của nồng độ dung dịch đệm (ammonium formate) trong pha động nước đến phép tách một số AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC (2.1 x 150 mm, 2.5 μm), với lưu lượng 0.7 mL/phút và nhiệt độ cột 50 °C. Pha động A là dung dịch ammonium formate trong nước ở các nồng độ khác nhau (5 mM, 10 mM, 20 mM và 40 mM), cùng pH 3.0; pha động B là acetonitrile chứa 0.1% FA. Chương trình rửa giải giống như mô tả trong phần Thực nghiệm. Cường độ pic tốt nhất đạt được ở nồng độ dung dịch đệm 20 mM.

Hình 5. Ảnh hưởng của nồng độ ammonium formate trong pha nước của pha động (pH 3,0) đến cường độ và độ phân giải pic của các AMG được chọn trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC.

1.4. Các yếu tố khác

Các yếu tố khác như nhiệt độ cột và nồng độ FA trong pha động B chỉ ảnh hưởng hạn chế đến cường độ pic, hình dạng pic và độ phân giải sắc ký. Các cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC có kích thước hạt khác nhau (1,7 μm và 2,5 μm) cho xu hướng tương tự trong các điều kiện sắc ký khác nhau (thành phần pha động, pH, nồng độ đệm, v.v.). Cột có kích thước hạt 2,5 μm (2,1 × 150 mm) cho phép sử dụng tốc độ dòng cao hơn (0,7 mL/phút) so với cột hạt 1,7 μm (2,1 × 100 mm) trong chương trình gradient tương ứng (0,2 mL/phút), giúp rút ngắn thời gian chạy. Cột hạt 2,5 μm (2,1 × 150 mm) được sử dụng trong phương pháp tối ưu cuối cùng.

2. Độ chọn lọc của phép phân tích

Phát hiện một pic gây nhiễu đối với SPC trong mẫu trắng mô cơ. Ban đầu, nghiên cứu sử dụng các chuyển tiếp MRM 351>98 và 351>207, vốn cũng được sử dụng trong các báo cáo khác.⁹ Trong nghiên cứu này, một pic chưa xác định được quan sát thấy trong mẫu trắng mô cơ tại RT 1,62 phút, chồng lấp với pic SPC (RT 1,56 phút). Tỷ lệ ion của pic chưa xác định này cũng khác với SPC. Để tránh nhiễu tiềm ẩn, phương pháp sử dụng các chuyển tiếp MRM thay thế cho SPC (351>333 và 333>140); không phát hiện pic gây nhiễu trong mẫu trắng.

Ngoài ra, các chuyển tiếp MRM của DSTP cũng được tối ưu hóa để giảm nhiễu do đồng vị của STP. STP (khối lượng phân tử 581 Da) và DSTP (583 Da) có cấu trúc hóa học tương tự và cùng kiểu phân mảnh. STP có pic đồng vị cùng khối lượng với DSTP, với độ phổ biến tương đối 5,8% so với pic đơn đồng vị tại m/z 581; pic này có thể gây nhiễu khi định lượng DSTP. Các chuyển tiếp MRM thay thế cho DSTP liên quan đến ion cộng proton của đồng vị DSTP (MRM 585>263, 586>247) được sử dụng, giúp giảm nhiễu từ STP xuống DSTP còn dưới 1% mà vẫn duy trì độ nhạy phù hợp cho DSTP. Khó có thể loại bỏ hoàn toàn nhiễu từ các dạng đồng vị của STP.

3. Ảnh hưởng nền mẫu

Hình 6 trình bày ảnh hưởng nền mẫu trong phân tích AMG bằng LC-MS/MS. Ảnh hưởng nền được đánh giá bằng tỷ lệ diện tích pic của dịch chiết mẫu trắng được bổ sung chuẩn ở mức 1.000 μg/kg sau làm sạch SPE so với dung dịch chuẩn 1.000 μg/kg trong dung dịch rửa giải SPE. Mức độ ảnh hưởng nền khác nhau đáng kể giữa các AMG, từ ức chế ion mạnh (tỷ lệ dưới 20%) đến tăng cường ion mạnh (tỷ lệ trên 170%). Vì vậy, cần sử dụng đường chuẩn phù hợp nền mẫu để định lượng AMG.

Hình 6. Ảnh hưởng nền mẫu, biểu thị bằng tỷ lệ diện tích pic của mẫu thực phẩm trắng được bổ sung chuẩn ở mức 1.000 μg/kg (sau làm sạch SPE) so với chuẩn 1.000 μg/kg trong dung dịch rửa giải SPE. Thanh sai số biểu thị ±SD (n=4).

4. Hiệu suất thu hồi của SPE

Hiệu suất thu hồi được tính bằng tỷ lệ diện tích pic của mẫu trắng được bổ sung chuẩn ở đầu quy trình chuẩn bị mẫu so với mẫu trắng được bổ sung chuẩn sau khi làm sạch SPE (xem Hình 7). Mức bổ sung chuẩn là 1.000 μg/kg. Đối với hầu hết AMG (ngoại trừ KAS) trong cả năm loại mẫu (mật ong, sữa, thịt bò, thịt lợn và gan), hiệu suất thu hồi nằm trong khoảng 40–100%, tương đương với kết quả đã công bố trên các nền thực phẩm tương tự.⁷˒⁹ KAS có hiệu suất thu hồi thấp. Nguyên nhân liên quan đến giá trị pKa thấp (pKa1 = 3,23) so với các AMG khác có pKa khoảng 7 trở lên. KAS tồn tại ở dạng ion hóa trong dung dịch nạp SPE (điều chỉnh pH đến 6,75 ± 0,25) nên không được giữ lại trên chất hấp phụ Oasis HLB.

Hình 7. Hiệu suất thu hồi AMG trong mẫu trắng được bổ sung chuẩn ở mức 1.000 μg/kg, sau chiết và làm sạch bằng cột Oasis HLB. Thanh sai số biểu thị ±SD (n=6).

5. Đặc tính hiệu năng của phương pháp LC-MS/MS

Phương pháp LC-MS/MS đã tối ưu được đánh giá trên các mẫu sữa, thịt bò, gan và mật ong. Giới hạn định lượng (LOQ), hệ số xác định (R2), khoảng tuyến tính, RT và độ chụm của RT trong từng nền thực phẩm được trình bày ở Bảng 3. Giá trị LOQ được ước tính từ mẫu trắng được thêm chuẩn sau SPE ở nồng độ thấp có tỷ số tín hiệu/nhiễu (S/N) ít nhất bằng 10, hoặc từ nồng độ thấp nhất của đường chuẩn, lấy giá trị cao hơn trong hai giá trị này. LOQ trong các thực phẩm này thấp hơn nhiều so với MRL được thiết lập tại các thị trường lớn, như trình bày ở Bảng 1. Giá trị R2 được xác định từ các chuẩn trên nền mẫu, thêm chuẩn sau SPE, ở 4–6 mức nồng độ. Phần lớn nền thực phẩm cho tính tuyến tính rất tốt (R2>0.99). Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của RT được xác định từ chuẩn trong dung môi, chuẩn trên nền mẫu và mẫu thêm chuẩn (n=57, độ chụm trong ngày). Tất cả AMG đều cho độ lặp lại RT rất tốt (RSD dưới 1.0%). Hình 8 trình bày sắc ký đồ chồng của 17 AMG trong mẫu sữa trắng được thêm chuẩn ở mức 2500 𝜇g/kg. Hệ số dung lượng (k’) của pic rửa giải sớm nhất (KAS) là 2.6.

Độ đúng của phương pháp được đánh giá bằng cách phân tích các mẫu trắng mật ong, sữa, thịt bò, thịt lợn và gan được thêm chuẩn ở mức 200 𝜇g/kg. Độ đúng được tính bằng tỷ số giữa nồng độ xác định được và nồng độ thêm chuẩn (Hình 9). AMI được sử dụng làm chuẩn nội. Mẫu trắng được thêm chuẩn ở mức 1000 𝜇g/kg được dùng làm mẫu hiệu chuẩn trong nền tương ứng (hiệu chuẩn một điểm). Hình 9 cũng trình bày độ đúng trung bình của từng AMG từ 5 mẫu và độ lệch chuẩn (SD). Độ đúng trung bình nằm trong khoảng 86%–122%, với SD từ 4%–23%. Các kết quả này phù hợp với những báo cáo về các nền thực phẩm tương tự.⁷,⁹ Đã phân tích 8 mẫu thực phẩm và không phát hiện AMG trong các mẫu này.

Bảng 3. Đặc tính hiệu năng của phương pháp LC-MS/MS đối với mẫu sữa, thịt bò, gan và mật ong.

Hình 8. Sắc ký đồ chồng của 17 aminoglycoside trong mẫu sữa trắng được bổ sung chuẩn ở mức 2.500 μg/kg, thu được trong điều kiện tối ưu cuối cùng.

Hình 9. Độ đúng khi xác định AMG trong mẫu trắng bổ sung chuẩn (200 μg/kg), sử dụng hiệu chuẩn một điểm và chất chuẩn nội (AMI). (n=2; thanh sai số biểu thị độ lệch so với giá trị trung bình).

6. Thảo luận

Các AMG có cấu trúc tương tự nhau nên khó phân tách. Cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC cho độ phân giải tốt đối với 17 AMG trong điều kiện sắc ký tối ưu, bao gồm pha động nước chứa ammonium formate 20 mM ở pH 3,0. Các pha tĩnh sulfoalkylbetaine khác cần nồng độ đệm cao hơn nhiều (đến 175 mM ammonium formate),⁹ không phù hợp cho phát hiện bằng MS. Chưa rõ nguyên nhân của sự khác biệt về nồng độ đệm tối ưu; tuy nhiên, có thể liên quan đến hạt BEH, vốn có hoạt tính silanol thấp hơn hạt silica. KAS không được đưa vào phương pháp cuối cùng vì không được giữ lại tốt trong SPE. Tuy nhiên, có thể phân tích KAS trực tiếp bằng dịch chiết trước bước làm sạch SPE.

Kết luận

Ảnh hưởng của các điều kiện sắc ký, bao gồm thành phần pha động, nồng độ đệm và pH, đến khả năng phân tách AMG trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC đã được khảo sát có hệ thống. Khác với các pha tĩnh sulfoalkylbetaine zwitterion khác cần nồng độ ammonium formate cao đến 175 mM, cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC có thể phân tách phù hợp và đạt độ nhạy cao đối với 17 AMG phổ biến bằng phương pháp rửa giải gradient trong 10 phút, sử dụng ammonium formate 20 mM trong nước ở pH 3,0 và acetonitrile chứa 0,1% FA. Cột SPE Oasis HLB cho khả năng làm sạch và hiệu suất thu hồi đạt yêu cầu đối với 16 AMG. Phương pháp LC-MS/MS tối ưu dựa trên cột Atlantis Premier BEH Z-HILIC và cột Oasis HLB được đánh giá trên mẫu sữa, thịt, gan và mật ong, cho độ nhạy rất tốt, độ đúng và độ chụm tốt. Kết quả cho thấy phương pháp HILIC-MS/MS này phù hợp để sàng lọc và định lượng AMG trong thực phẩm.

Tài liệu tham khảo

• Tolerances for Residues of New animal Drugs in Food. 21 C.F.R. § 556 (2020) Code of Federal Regulations, revised as of April 1, 2020, 21CFR556. Website: https://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfcfr/CFRSearch.cfm?CFRPart=556&showFR=1.
• Commission regulation (EU) No 37/2010 of 22 December 2009 on Pharmacologically Active Substances and Their Classification Regarding Maximum Residue Limits in Foodstuffs of Animal Origin. Official J. European Union L15, 20.1.2010.
• National Food Safety Standard on Maximum Residue Limits for Veterinary Drugs in Foods (GB 31650-2019), issued on Sept 6, 2019. Effective on April 1st, 2020. Ministry of Agriculture and Rural Affairs, China.
• The Japan Food Chemical Research Foundation, Positive List System – Antibiotics. Website: https://www.ffcr.or.jp/en/zanryu/the-japanese-positive/positive-list-system---antibiotics.html.
• Maximum Residue Limits (MRLs) and Risk Management Recommendations (RMRs) for Residues of Veterinary Drugs in Foods CX/MRL 2-2018, Codex Alimentarius International Food Standards, Food and agriculture Organization of the United Nations, World Health Organization. Website: http://www.fao.org/fao-who-codexalimentarius/codex-texts/dbs/vetdrugs/veterinary-drugs/en/
• Screening for Aminoglycosides by LC/MS-MS, USDA Food Safety and Inspection Service, Office of Public Health Science, CLG-AMG4.03, effective: Nov 2nd, 2020.
• Glinka, M., Wojnowski, W., Wasik, A., Determination of Aminoglycoside Antibiotics: Current Status and Future Trends. Trends in Analytical Chemistry 131 (2020) 116034.
• Dolan, J. Ion pairing – Blessing or Curse? LCGC Europe, 2008; Volume 21, Issue 5, pp 258-263.
• Díez C, Guillarme D, Staub Spörri A, Cognard E, Ortelli D, Edder P, Rudaz S. Aminoglycoside Analysis in Food of Animal Origin With a Zwitterionic Stationary Phase and Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. Anal Chim Acta. 2015; 882:127-39.
• Young, M.S, van Tran, K., Goh, E., and Shia, J.C., UPLC/MS-MS Determination of Aminoglycoside Antibiotics in Meat and Milk, Waters Application Note 720004512EN, 2012.

Sản phẩm nổi bật

• Arc Premier System
• Xevo TQ-S micro Triple Quadrupole Mass Spectrometry
• MassLynx MS Software
• TargetLynx

Nguồn: Bài viết gốc trên Waters (tiếng Anh)